دانشگاه تهران مجله تحقیقات دامپزشکی (Journal of Veterinary Research) 2008-2525 73 3 2018 09 23 Proteomic Profiling Survey and Identification of Some Immunogenic Proteins From Larvae of Rhipicephalus (Boophilus) annulatus Tick (Mazandaran Strain) .بررسی پروفایل پروتئوم و شناسایی برخی پروتئینهای کنه بوفیلوس آنولاتوس(سویه مازندران) 265 271 68397 10.22059/jvr.2018.201949.2443 FA صدیقه نبیان گروه انگل شناسی دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران، ایران 0000-0002-2350-4151 محمد طاهری آزمایشگاه مرکزی رستگار دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران، ایران زهرا اسدالهی گروه انگل شناسی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران، ایران محمد مهدی رنجبر موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی کرج، ایران Journal Article 2018 02 26 <strong>BACKGROUND:</strong> <em>Rhipicephalus (Boophilus) annulatus</em> is an important tick, which can transmit parasites and bacteria to cattle. It can also cause hides damage, growth reduction and sometimes paralysis. So, the tick infestation can be regarded as a major problem in the livestock industry. Different control methods including the chemical ones are used to fight ticks, but because of developing resistance to chemical treatments, researchers try to find some immunogenic proteins for vaccine production. Investigating these tick proteins could be an important step in the identification of biological molecules for the purpose of developing control strategies. <strong>OBJECTIVES:</strong> The aims of present study were to evaluate and analyze Boophilus annulatus larval extract proteins by 2- dimensional gel electrophoresis patterns (proteomic profiling) and identification of some its immunogenic proteins by two dimensional immunoblotting and  MALDI TOF/TOF mass spectrometry  referred to as Mazandaran strains. <strong>METHODS:</strong> The steps followed here were: tick preparation and culture, 1-D electrophoresis, and then 2-D electrophoresis, Western blotting and Mass spectrometry and then Mass data were analyzed by Mascot software. <strong>RESULTS:</strong> Analysis of the produced 2D image identified approximately 80 protein spots with different Molecular weight and PI by Coomassi blue staining. Based on immunogenicity (through Western blotting) and high concentration, 10 protein spots (between 14 and 97 kDa) candidates for MALDI TOF and MALDI TOF - TOF MS.  Among the 10 proteins spots, Vitellogenin, Vitellogenin-2 precursor, tropomyosin, hypotethical protein ISCW001652 were identified proteins with immunogenic properties. Also, quantification analysis showed some proteins had more quantity in soluble larvae protein extract and some such as vitellogenin had some isoforms. <strong>CONCLUSIONS:</strong> The results of this study could be a preliminary step towards selecting proteins candidated to develop vaccines against ticks. مقدمه: ریپی‌سفالوس (بوافیلوس) آنولاتوس یک کنه تک میزبانه است که قادر به انتقال انگل‌ها و باکتری‌ها به گاو، آسیب به چرم، کاهش رشد و گاهی فلجی می‌باشد. لذا آلودگی به این کنه‌ها می‌تواند به عنوان یک مشکل عمده در صنعت دامپروری محسوب گردد. روش‌های کنترلی مختلف از جمله روش‌های شیمیایی جهت مبارزه با کنه‌ها استفاده می‌شود اما بدلیل ایجاد مقاومت به درمان شیمیایی، محققان در تلاش برای یافتن برخی پروتئین‌های ایمونوژن جهت تولید واکسن می‌باشند. بررسی پروتئین‌های این کنه، می‌تواند گامی مهم در شناخت بیشتر مولکول‌های بیولوژیک، جهت توسعه استراتژی‌های کنترل باشد. هدف از مطالعه حاضر ارزیابی پروتئین‌های لارو ریپی‌سفالوس ( بوافیلوس) آنولاتوس با الکتروفورز دوبعدی و شناسایی برخی پروتئین‌های ایمونوژن آن با وسترن بلاتینگ دوبعدی و اسپکترومتری جرمی MALDI TOF/TOF مربوط به سویه‌ی مازندران می‌باشد.<br /> مواد و روش‌ها: جهت انجام این پژوهش اقدام به کشت کنه، انجام الکتروفورز یک بعدی و دو بعدی، وسترن بلاتینگ و اسپکترومتری جرمی گردید و نتایج به دست آمده با کمک نرم افزار Mascot مورد آنالیز قرار گرفت.<br /> نتایج: درآنالیز تصویر دوبعدی به دست آمده از الکتروفورز دوبعدی، تقریبا 80 نقطه پروتئینی با وزن مولکولی و نقطه ایزوالکتربک (PI) متفاوت با رنگ آمیزی کوماسی بلو شناسایی شد. همچنین بر اساس دو فاکتور ایمنی زایی (براساس آزمون وسترن بلات) و بالا بودن غلظت ، 10نقطه پروتئینی (با وزن مولکولی بین14 و 97 کیلو دالتون) برای انجام اسپکترومتری جرمی MALDI TOF و MALDI TOF-TOF MS انتخاب گردید. از بین این 10 نقطه، پروتئین های وتیلوژنین، پیش ساز وتیلوژنین ، تروپومیوزین، و پروتئین فرضی ISCW001652 به عنوان پروتئین‌های با خاصیت ایمنی-زایی شناسایی شدند. همچنین آنالیز محتوای عصاره نشان داد برخی پروتئین‌ها از جمله وتیلوژنین در محلول عصاره پروتئینی لارو دارای ایزوفرم‌های مختلفی هستند.<br /> بحث: نتایج مطالعه حاضر می تواند گامی نخست در جهت انتخاب پروتئین‌های کاندید برای ساخت و توسعه واکسن‌های ضد کنه باشد. https://jvr.ut.ac.ir/article_68397_6a90d386fc358468a5fa2741d825434a.pdf