نوع مقاله : اپیدمیولوژی و بهداشت عمومی
نویسندگان
1 بخش تحقیقات بیماریهای طیور، موسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی؛ سازمان تحقیقات، آموزش و ترویج کشاورزی، تهران، ایران
2 دفتر بهداشت و مدیریت بیماریهای طیور، سازمان دامپزشکی کشور، تهران،
3 گروه میکروبیولوژی و ایمنولوژی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه تهران، تهران، ایران
4 گروه علوم بالینی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه فردوسی، مشهد، ایران
5 دفتر بهداشت و مدیریت بیماریهای طیور، سازمان دامپزشکی کشور، تهران، ایران
چکیده
کلیدواژهها
عنوان مقاله [English]
نویسندگان [English]
BACKGROUND: Avian influenza is one of the most important diseases both economically and from a public health viewpoint.
OBJECTIVES: To investigate the serological and molecular prevalence of AI-H9N2 in live bird markets, bird gardens, parks and zoos.
METHODS: This cross-sectional study was conducted from August to December 2016. In each unit, 40 blood samples from different bird species and 60 cloacal samples from waterfowl (ducks and geese) were taken. All sera samples were tested by HI for detection of antibodies against H9N2 virus. The birds with sera titer =>4 (log2) and units with at least one positive bird were considered as positive. Swab samples were tested by RT-PCR method using two pairs of primers to detect M and H9 gene of H9N2 virus.
RESULTS: 2638 sera samples from birds in 127 units in 22 provinces and 3001 swab samples from duck and goose were taken. 73 units out of 127 (57.48 %; 95 % confidence interval, 66.2 % - 48.4 %) and 720 birds from a total of 2638 birds (27.29 %: 95 % confidence interval, 29.6 % - 25.6 %) were sero-positive. Among the bird species, the highest seroprevalence was 47.6 % and 45.3 % in turkey and chicken, respectively and the lowest seroprevalence was 13.8 % and 16.3 % for ducks and geese, respectively. 39 pooled samples from 18 units (14.75 %) were positive.
CONCLUSIONS: The results of this study showed high prevalence and circulation of avian influenza H9N2 viruses among poultry in these markets. Organizing the markets by improving the health and biosecurity of the markets, and it is necessary to educate the people and continuously surveillance the birds that offered in the markets to control the disease.
کلیدواژهها [English]
آنفلوانزای پرندگان یکی از مهمترین بیماریهای مشترک بین انسان و دام میباشد و از نظر اقتصادی، سیاسی، اجتماعی و بهداشت عمومی دارای اهمیت میباشد. این بیماری توسط ویروسهای تیپ A آنفلوانزا متعلق به خانواده اورتومیکسوویریده ایجاد میشود. ویروسهای آنفلوانزا دارای ژنوم RNA تک رشتهای، چند قسمتی و با قطبیت منفی میباشند که در خانواده اورتومیکسوویریده قرار میگیرند (4). این خانواده دارای هفت جنس شامل: آنفلوانزای تیپ A، B، C و D، کارانجاویروس، توگوتوویروس و آیزاویروس میباشد (11). ویروسهای آنفلوانزای تیپ A که در پرندگان بیماری آنفلوانزا را ایجاد میکنند، از دو نوع برجستگی گلیکوپروتئینی عمده شامل تریمرهای هماگلوتینین (HA) میلهای شکل و تترامرهای نورآمینیداز (NA) قارچی شکل تشکیل شدهاند. ویروسهای آنفلوانزای تیپ A براساس واکنشهای سرمی مربوط به گلیکوپروتئینهای سطحی هماگلوتینین (HA) و نورآمینیداز (NA) به تحت تیپهای HA و NA تقسیم میشوند. تاکنون 18 تحت تیپ هماگلوتینین (H1-H18) و 11 تحت تیپ نورآمینیداز (N1-N11) شناسایی شده است. به استثنای H17N10 و H18N11 که اخیراً از خفاش جدا شده است، سایر تحت تیپها در پرندگان در حال گردش میباشد (4). پروتئین HA گلیکوپروتئین فیوژن غشایی و اتصال به گیرنده میباشد و القاکننده آنتیبادی نوترالیزان در عفونت ویروسی است. پروتئین NA علاوه بر القای آنتیبادی نوترالیزان، در رها شدن ویروس نتاج از سلول در مراحل انتهایی تکثیر نقش مهمی را ایفا میکند. هر دو پروتئین HA و NA نقش حیاتی در پاتوژنیسیته، آنتیژنیسیته ویروس و طیف میزبانی ویروسهای آنفلوانزای پرندگان را بازی میکنند. بدلیل مکانیسم ناکامل تصحیحکنندگی RNA پلیمراز در ویروس آنفلوانزا، ایجاد تنوعی از ژنهای HA و NA غالباً ممکن است اتفاق بیفتد و منجر به ظهور سویههای واریانت جدید گردد (4).
سازمان بهداشت جهانی دام (OIE)، ویروسهای آنفلوانزای پرندگان را براساس بیماریزایی در طیور به دو پاتوتیپ تقسیم میکند. ویروسهای با بیماریزایی پایین (LPAI) و ویروسهای با بیماریزایی بالا (HPAI) که تحت عنوان آنفلوانزای فوق حاد بیان میشود. تا به امروز کلیه ویروسهای با بیماریزایی بالا متعلق به دو تحت تیپ H5 و H7 میباشد، اما تمام تحت تیپهای H5 و H7 فوق حاد نیستند و برخی از آنها بیماریزایی پایینی دارند. تمام تحت تیپهای H5 و H7 تحت عنوان آنفلوانزای اخطارکردنی بیان میشوند (14).
ویروس آنفلوانزای پرندگان تحت تیپ H9N2 شایعترین ویروس آنفلوانزا با بیماریزایی کم در بین طیور در سراسر دنیا میباشد. پرندگان آبزی وحشی میزبان طبیعی ویروسهای آنفلوانزا هستند، اما ویروسهای H9N2 نسبتاً غیرمعمول در این پرندگان میباشد (9). ویروسهای آنفلوانزای H9N2 که با طیور سازگار شدهاند، به عنوان یک نگرانی بزرگ در 20 سال گذشته در صنعت طیور بوده است. اما در عین حال به دلیل اینکه برخی از دودمانهای این ویروس قابلیت انتقال به انسان را دارند، به عنوان یک نگرانی بهداشت عمومی نیز تلقی میشود (1،10).
اولین بار این ویروس از بوقلمون در دهه 1960 در آمریکا جدا شد و تا دهه 1990 گزارش رخدادهای تک گیر بیماری در دنیا وجود دارد (7). در اواسط دهه 1990 بیماری از جوجههایی در گاندونگ چین و سپس در سراسر چین گزارش شد (19). در اواخر دهه 1990 بیماری از تعدادی دیگر از کشورهای آسیایی، خاورمیانه و شمال آفریقا گزارش شد و اکنون در بسیاری از آن کشورها بومی است (7).
در کشور ما در اواسط تیرماه سال 1377 این تحت تیپ خود را در مرغداریهای اطراف تهران و قزوین بصورت بیماری ناشناخته نشان داد و به سرعت بین مزارع تخمگذار کشور گسترش یافت و اکنون در کشور بومی شده است (13).
آنالیز فیلوژنتیک ژن NA تحتتیپ N2 دو دودمان عمده آمریکای شمالی و اوراسیا را نشان میدهد. متعاقباً دودمان اوراسیا به 4 خوشه BJ/94-like و یا Y280-like، G1-like، Y439-like و F/98-like تقسیمبندی میشوند (20).
صنعت پرورش طیور در ایران از نظر اقتصادی، اجتماعی و امنیت غذایی دارای اهمیت ویژهای است. با توجه به شرایط جغرافیایی و طبیعت مناسب، در سالهای اخیر پرورش طیور صنعتی و بومی در اکثر مناطق کشور گسترش یافته است. در پرورش طیور صنعتی ایران بزرگترین تولید کننده در خاورمیانه میباشد (17). به دلیل قیمت مناسب، گوشت مرغ و تخم مرغ با سرانه مصرف 1/26 کیلوگرم و 7/10 کیلوگرم در برابر گوشت قرمز و ماهی به ترتیب با 43/11 و 2/15 کیلوگرم به عنوان مهمترین منبع پروتئینی خانوارها میباشد (5).
علاوه بر طیور صنعتی، پرورش طیور بومی نیز در کشور دارای رونق میباشد. طبق آمار GIS در بیش از 60000 روستا در کشور طیور بومی پرورش و نگه داری میشوند و حدود 50 میلیون طیور بومی در کشور پرورش داده میشود. جهت عرضه و فروش طیور بومی بیش از 100 بازار زنده فروشی وجود دارد. تقریباً در اکثر مناطق روستایی کشور، طیور بومی پرورش داده میشوند و بیشتر آنها برای فروش در بازارها عرضه میشوند. در این بازارها انواع گونههای پرندگان عرضه میشوند و در کنار هم قرار میگیرند. تنوع گونهها، ارتباط آنها با هم، پایین بودن وضعیت بهداشتی و امنیت زیستی بازارها سبب میشود این بازارها به عنوان منبع بالقوه برای ویروسهای آنفلوانزا مطرح باشند (3).
با توجه به تعدد بازارهای فروش پرندگان در کشور و اهمیت طیور بومی در نگه داری و انتقال ویروسهای آنفلوانزای H9N2، این مطالعه با هدف بررسی شیوع سرمی و مولکولی این بیماری در بازارهای فروش پرندگان زنده، باغهای پرندگان و پارکهای کشور انجام گرفت.
روش انجام مطالعه و حجم نمونه: این مطالعه به صورت مقطعی (Cross- sectional) و از مرداد ماه تا آخر آذر ماه سال 1395 در تمامی بازارهای فروش پرندگان زنده، باغ پرندگان، پارکها و باغ وحشهایی که در زمان انجام مطالعه فعال بوده و پرنده داشتند انجام گرفت. از هریک از واحدها حداقل از 40 پرنده از گونههای مختلف خونگیری شد. تعداد پرنده مورد نیاز برای نمونهبرداری جهت تشخیص با در نظر گرفتن شیوع 30 درصد و با 95 درصد اطمینان در سطح پرنده انتخاب گردید. همزمان از هر یک از واحدها از 60 پرنده آبزی (اردک و غاز) نیز نمونه سواب کلواک اخذ گردید. در صورتی که تعداد پرنده آبزی کمتر از 60 پرنده بود، از تمامی آنها نمونه سواب اخذ شد. تعداد پرنده لازم برای شناسایی ویروس، با در نظرگرفتن شیوع 5 درصد ویروس در پرندهها و با 95 درصد اطمینان محاسبه شد (6).
طیور بومی نقش مهمی در معیشت و اقتصاد روستاییان در ایران دارند و علاوه بر تأمین تخم مرغ و گوشت سفید مورد نیاز آنها، با فروش مازاد تولید، بخشی از هزینههای زندگی روستاییان از این راه تأمین میشود. بازارهای فروش پرندگان زنده به عنوان یکی از مهمترین مراکز عرضه تولیدات طیور بومی روستاییان در سراسر کشور و به خصوص استانهای شمالی تلقی میگردد. در این بازارها طیور پرورش داده شده به صورت زنده و کشتار شده عرضه میشوند. علاوه بر طیور بومی، در فصل مهاجرت پرندگان مهاجر، پرندگان شکار شده نیز به صورت زنده و کشتار شده عرضه میگردند. تنوع گونههای طیور عرضه شده در کنار تنوع فروشندگان و خریداران از نظر جغرافیایی باعث شده این بازارها گاهاً فراتر از منطقهای عمل کرده و نقش استانی و حتی ملی داشته باشند به گونهای که در این بازارها فروشندگان و خریدارانی از مناطق مختلف کشور حضور داشته باشند. از طرفی بسیاری از پرندگانی که در بازارها عرضه شده و فروخته نمیشوند، توسط فروشندگان در روزهای بعد به بازاهای شهرهای مجاور منتقل شده و شانس انتقال بیماری به این طریق نیز افزایش مییابد. در این میان شرایط نامطلوب بازارها از نظر بهداشتی و امنیت زیستی باعث فراهم آوردن شرایط مناسب برای تبادل انواع عوامل بیماریزا و به خصوص ویروسهای آنفلوانزا بین طیور عرضه شده و هم چنین شرایط انتقال با وسایل نقلیه، افراد و حتی سایر وسایل موجود در بازارها را فراهم نماید. در بازارهای کشور عرضه پرنده زنده بدون رعایت اصول اولیه امنیت زیستی به همراه عرضه پرندگان به صورت کشتار شده و حتی کشتار و پرکنی در محل شرایط را برای انتقال و گسترش ویروسهای آنفلوانزا دوچندان مساعد نموده است. از طرفی تراکم بالای این پرندگان باعث افزایش شانس انتقال و گسترش آنفلوانزا و حفظ بقای ویروس به دلیل وجود مخازن حساس و زیاد در آنها میشود. این ارتباط بین طیور بومی باعث گسترش عفونت از پرندگان آلوده به سایر طیور و هم چنین انتقال توسط جابهجایی پرنده زنده آلوده، افراد، وسایل نقلیه و... به سایر مناطق و حتی طیور صنعتی میگردد و نقش مهمی در بقای ویروس و به تبع آن گسترش بیماری دارد.
ویروس H9N2 دارای بیماریزایی بالایی برای ماکیان نیست. اما طغیانها و اپیدمیهای مختلف این ویروس در سالهای گذشته و در نقاط مختلف دنیا و از جمله ایران خسارتهای شدیدی را به صنعت پرورش طیور وارد کرده است. در مطالعه حاضر بیش از 57 درصد از واحدهای نمونهبرداری شده و بیش از 27 درصد پرندگان نمونهبرداری شده از نظر سرمی علیه آنفلوانزای H9N2 مثبت بودند. شیوع بالای عیار سرمی H9N2 بدون داشتن علائم بیماری میتواند به دلیل مواجهه مداوم طیور بومی با این ویروس و کسب ایمنی در این پرندگان ناشی از گردش این ویروس در محیط و بین طیور بومی باشد. در مطالعهای که در سال 1393 در بازارهای کشور انجام گرفت، 3/53 درصد بازارها سرم مثبت بودند که مانند مطالعه حاضر شیوع بالایی داشته است. در مطالعه مذکور 16 درصد نمونههای اخذ شده نیز سرم مثبت بودند که نسبت به مطالعه حاضر شیوع در بین پرندگان پایین بوده است (7). در مطالعهای که توسط Saadat و همکاران در سال 2014 در استان بوشهر بر روی 1530 نمونه خون ماکیان بومی جهت تعیین تیتر آنتی بادی علیه ویروس آنفلوانزای (H9N2) انجام گرفت، 39 درصد نمونهها دارای تیتر سرمی علیه ویروسهای آنفلوانزا H9N2 بودند که نشان دهنده شیوع بالای H9N2 در طیور بومی استان بوشهر میباشد (16).
در مطالعه حاضر بالاترین میزان شیوع در بین مرغها با بیش از 45 درصد سرم مثبت و کمترین مربوط به اردک و غاز با 13 و 17 درصد شیوع سرمی بود. این تفاوت در میزان شیوع احتمالاً به چند دلیل میتواند ایجاد شده باشد. اول تراکم بالاتر این گونه و به تبع آن ارتباط و تماس بیشتر پرندهها با هم و تبادل بیشتر ویروس و در نتیجه مواجهه مداوم و تولید پاسخ ایمنی توسط پرندگان مواجهه یافته، اما در مطالعات متعددی که انجام گرفته، مشخص شده پاسخهای آنتیبادی در مواجهه با ویروسهای آنفلوانزا در جوجهها > قرقاول> بوقلمون> بلدرچین> اردک بوده است. علت این موضوع میتواند به دلیل سرعت رسوب پادتنها در سرم، فعالیت کمپلمان و یا فرایند شناسایی و مبارزه با ویرس در بدن میزبان باشد (18).
در مطالعه حاضر در 15 درصد از واحدها، ویروس شناسایی شد. با توجه به اینکه نمونههای سواب فقط از طیور آبزی (اردک و غاز) اخذ شده بود، نتایج حاکی از گردش نسبتاً بالای ویروس در بین طیور عرضه شده در بازارها میباشد. نتایج این مطالعه مشابه نتایج مطالعه انجام گرفته توسط Majidzadeh و همکاران در 2012 بر روی 100 نمونه مدفوع پرندگان وحشی (اردک، گنجشک، طوطی، کلاغ، قو و کبوتر) موجود در پارکهای شهر تهران (آزمایش RT- PCR) بود که 14 درصد نمونههای مدفوع برای H9 مثبت بودند (13). در مطالعه انجام گرفته در بازارهای چین در سالهای 2014 و 2015 بیش از 34 درصد نمونههای اخذ شده برای H9N2 در آزمون مولکولی (RRT-PCR)، مثبت بودند (20).
اما بر خلاف نتایج این مطالعه، در مطالعهای که توسط Poursafar و همکاران در سال 2012 بر روی 550 نمونه سواب اخذ شده از کلواک اردکهای بومی استان گیلان جهت ردیابی ویروسهای آنفلوانزا (آزمایش RT-PCR) انجام گرفت، ویروس آنفلوانزای پرندگان در هیچ یک از نمونههای مورد آزمایش ردیابی نشد (15).
این مقاله مستخرج از پروژه مصوب موسسه تحقیقات واکسن و سرم سازی رازی با کد 960683-96023-056-18-18-12 و مشترک با دفتر بهداشت و مدیریت بیماریهای طیور سازمان دامپزشکی و با هم کاری ادارات کل دامپزشکی استانهای مربوطه انجام گرفته که از همکاری آنها در اجرای این مطالعه تشکر و قدردانی میگردد.
بین نویسندگان تعارض در منافع گزارش نشده است.
References