بررسی ترانسکریپتومی ویژگی‌های مولکولی انتریت پاروویروسی در سگ‌ بر پایه پروفایل بیان ژنی

نوع مقاله : مقایسه ژنومی

نویسندگان

1 گروه بیوتکنولوژی، پژوهشکده علوم محیطی، دانشگاه تحصیلات تکمیلی صنعتی و فناوری‌های پیشرفته، کرمان، ایران.

2 گروه علوم بالینی، دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران.

3 دانشکده دامپزشکی، دانشگاه شهید باهنر کرمان، کرمان، ایران.

چکیده

زمینه مطالعه: بیماری انتروپاتی التهابی مزمن (Chronic Inflammatory Enteropathy) یا CIE در سگ‌ها به اختلالی اشاره دارد که با التهاب مزمن در روده‌ها همراه است و می‌تواند منجر به علائمی مانند اسهال مداوم، استفراغ، کاهش وزن و بی‌اشتهایی شود؛ این بیماری معمولاً به علت عوامل مختلفی از جمله حساسیت‌های غذایی، عفونت‌ها و اختلالات ایمنی ایجاد می‌شود و تشخیص و درمان مناسب آن برای بهبود کیفیت زندگی و سلامت سگ‌ها ضروری است.
هدف: این پژوهش به بررسی مکانیسم‌های مولکولی و الگوهای بیان ژن در بیماری CIE با استفاده از روش‌های بیوانفورماتیکی و آزمایش‌های مولکولی می‌پردازد.
روش کار: در این مطالعه، داده‌های توالی‌یابی RNA تک‌سلولی (scRNA-seq) مربوط به نمونه‌های سگ‌های سالم و مبتلا به آنتروپاتی التهابی مزمن (CIE) با استفاده از پکیج Seurat نسخه ۳ پردازش و نرمال‌سازی شدند و پس از شناسایی ۲۰ خوشه سلولی مجزا، بیان ژن‌های کلیدی مرتبط با مسیرهای سیگنالینگ اصلی با روش RT-qPCR در ۳۵ نمونه (۲۵ نمونه بیمار و ۱۰ نمونه کنترل) مورد ارزیابی قرار گرفت.
نتایج: نتایج آنالیز بیوانفورماتیک ۳۸۵ ژن با بیان تفاوت‌دار معنادار (p-value<0.05) را شناسایی نمود که غنی‌سازی Pathway آنها مسیر سیگنالینگ عفونت ویروس لوسمی سلول T انسانی (cfa05166) را نشان داد و validation با RT-qPCR تغییرات معنادار ژن‌های کلیدی این مسیر از جمله افزایش ۵ برابری EGR2 (p<0.01) و کاهش ۳.۳ برابری NFKBIA (p<0.05) را تأیید کرد.که نقش آن‌ها را در متابولیسم گلوکز و تنظیم ایمنی بود.

نتیجه‌گیری نهایی: مطالعه حاضر نشان داد که اختلال در تنظیم مسیرهای سیگنالینگ مرتبط با عفونت ویروسی و پاسخ ایمنی از جمله مسیر cfa05166 و JAK-STAT نقش محوری در پاتوژنز بیماری ایفا می‌کند که می‌تواند زمینه‌ساز توسعه بیومارکرهای تشخیصی و رویکردهای درمانی نوین برای این بیماری باشد.

کلیدواژه‌ها

موضوعات


عنوان مقاله [English]

Transcriptomic Analysis of Molecular Features in Canine Parvoviral Enteritis Based on Gene Expression Profiling

نویسندگان [English]

  • Nahid Askari 1
  • Morteza Hadizadeh 1
  • Dariush Vosough 2
  • Ali Shafieipour 3
1 Department of Biotechnology, Institute of Sciences and High Technology and Environmental Sciences, Graduate University of Advanced Technology, Kerman, Iran.
2 Department of Clinical Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Bahonar University of Kerman, Kerman, Iran.
3 Faculty of Veterinary Medicine, Shahid Bahonar University of Kerman, Kerman, Iran.
چکیده [English]

BACKGROUND: Chronic Inflammatory Enteropathy (CIE) in dogs refers to a disorder characterized by chronic intestinal inflammation. It can lead to symptoms such as persistent diarrhea, vomiting, weight loss, and anorexia. This disease is typically caused by various factors, including food allergies, infections, and immune disorders. Accurate diagnosis and appropriate treatment are essential for improving the quality of life and health of affected dogs.
OBJECTIVES: This research investigates the molecular mechanisms and gene expression patterns in CIE using bioinformatics methods and molecular experiments.
METHODS: single-cell RNA sequencing (scRNA-seq) data from samples of healthy dogs and those with chronic inflammatory enteropathy (CIE) were processed and normalized using the Seurat package version 3. After identifying 20 distinct cell clusters, the expression of key genes associated with major signaling pathways was evaluated using RT-qPCR in 35 samples (25 diseased samples and 10 control samples).
RESULTS: Comparing gene expression between CIE samples (4 samples) and healthy samples (3 samples) yielded 385 differentially expressed genes (DEGs). KEGG pathway analysis revealed a key signaling pathway associated with Human T-cell Leukemia Virus type 1 (HTLV-1) infection, involving 217 genes. Among these, 15 genes were of particular importance in this study. These findings, confirmed by bioinformatic methods, provide deeper insight into the genetic regulation in CIE and suggest mechanisms affecting cellular function. RT-qPCR results showed that EGR2 was upregulated in diseased samples, while CSF2 and ETS2 were downregulated. NFKBIA also showed a significant decrease. Conversely, the overexpression of SLC2A1 and NFATC4 indicated their roles in glucose metabolism and immune regulation.
CONCLUSIONS: The present study revealed that dysregulation of signaling pathways associated with viral infection and immune response, including the cfa05166 and JAK-STAT pathways, plays a pivotal role in the pathogenesis of the disease, which could pave the way for the development of diagnostic biomarkers and novel therapeutic approaches for this enteropathy.

کلیدواژه‌ها [English]

  • Bioinformatics analysis
  • Biomarkers
  • Signaling pathway
  • Gene expression
  • Real-time RT-qPCR